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細(xì)胞復(fù)蘇、傳代和凍存


服務(wù)簡介:

永生性的細(xì)胞可以無限制的生長,當(dāng)生長一定數(shù)量之后,由于空間的限制和接觸性抑制,細(xì)胞不再生長,甚至可能死亡,因此細(xì)胞需要減少密度,以至于細(xì)胞得以生長和存活。對于細(xì)胞保存,我們將細(xì)胞保存在液氮罐中,使用細(xì)胞時,需要將細(xì)胞復(fù)蘇。


技術(shù)原理:

細(xì)胞復(fù)蘇:從液氮中取出凍存管,于37℃水浴鍋中至冰晶溶解,凍存管中的液體轉(zhuǎn)移至離心管,離心后,棄上清,加入完全培養(yǎng)基吹打混勻后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶,于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代:PBS清洗,胰蛋白酶消化,完全培養(yǎng)基終止消化,離心機(jī)離心,留1/3的細(xì)胞混合液轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶內(nèi),于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)

細(xì)胞凍存:重懸得到細(xì)胞液,取1.5ml重懸細(xì)胞液,加入10%細(xì)胞級DMSO,放入梯度凍存盒內(nèi),放置-80度冰箱,3天后,將凍存管移至液氮內(nèi)。




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